細(xì)胞內(nèi)因子流式細(xì)胞檢測(cè)（FC)操作步驟

    流式細(xì)胞檢測(cè)是具有高靈敏度、多參數(shù)、單細(xì)胞模式、定量能力強(qiáng)等多重優(yōu)勢(shì)的細(xì)胞分析方法。其中細(xì)胞內(nèi)因子流式細(xì)胞檢測(cè)尤其以樣品處理簡(jiǎn)單和適用面廣在生物醫(yī)學(xué)研究中發(fā)揮重要作用。 實(shí)驗(yàn)步驟如下：

1. 收集細(xì)胞:將經(jīng)過(guò)各種處理的待測(cè)細(xì)胞（如果是分泌型蛋白檢測(cè)需要高爾基體阻斷劑）收集到離心管中，4℃、300g離心5分鐘，棄去上清，收集細(xì)胞。

2. Fc受體封閉：利用200μl流式細(xì)胞染色液（含0.2%BSA的PBS）重懸細(xì)胞，加入50μl Fc受體封閉抗體（利用流式細(xì)胞染色液稀釋?zhuān)�，冰�?/span>10分鐘。

3. 細(xì)胞表面染色：加入50μl細(xì)胞表面染色相關(guān)流式抗體（利用流式細(xì)胞染色液稀釋?zhuān)�，冰�?/span>30分鐘。

4. 清洗：各管細(xì)胞加入1ml流式細(xì)胞染色液，4℃、300g離心5分鐘，棄去上清。

5. 固定破膜：利用上述細(xì)胞離心后殘余液體重懸細(xì)胞，然后加入250μl細(xì)胞固定液，冰浴20分鐘固定細(xì)胞。棄去多聚甲醛后，用冰冷PBS洗三遍，每次5分鐘破膜：加入0.25%Triton X-100（PBS配制）破膜20分鐘。

6. 清洗：4℃、600g離心5分鐘，棄去細(xì)胞固定液；然后加入1ml破膜液，4℃、600g離心5分鐘，棄去破膜液；再加入1ml破膜液，4℃、600g離心5分鐘，棄去破膜液。

7. 細(xì)胞內(nèi)因子染色：利用200μl破膜液重懸細(xì)胞，然后加入50μl細(xì)胞內(nèi)因子染色相關(guān)流式抗體（利用破膜液稀釋?zhuān)�，冰�?/span>30分鐘。

8. 清洗：加入1ml破膜液，4℃、600g離心5分鐘，棄去破膜液；再加入1ml破膜液，4℃、600g離心5分鐘，棄去破膜液；加入400μl流式細(xì)胞染色 液重懸細(xì)胞

    9.上機(jī)檢測(cè)。