細胞免疫熒光檢測（IF)操作步驟

    免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結合來顯示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗結合，其次是帶有熒光基團的二抗識別并結合一抗，熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡下即可觀察到熒光。實驗步驟如下：

1. 接種細胞:將處于對數生長期的細胞接種于共聚焦專用培養皿里，培養24小時。

2. 固定：待細胞融合度達到50-70%時，棄去培養基，用冰冷PBS洗3遍，然后加入4%冷的多聚甲醛固定20分鐘。

3. 清洗：棄去多聚甲醛后，用冰冷PBS洗三遍，每次5分鐘。

4. 破膜：加入0.25%Triton X-100（PBS配制）破膜20分鐘。

5. 清洗：冰冷PBS洗三遍，每次5分鐘。

6. 封閉：加入含5%BSA的PBS室溫封閉1小時。

7. 一抗孵育：加入含5%BSA的PBS配制的一抗溶液室溫孵育2小時或4℃過夜。

8. 清洗：加入PBST（含0.1%吐溫20）洗三遍，每次5分鐘。

9. 二抗孵育：加入含5%BSA的PBS配制的二抗溶液室溫孵育1小時（避光）。

10.清洗：加入PBST洗三遍，每次5分鐘。

11.DAPI染核：加入DAPI染色液，室溫染色10分鐘。

12.加入PBST洗三遍，每次5分鐘。

13.上機檢測。