酶聯(lián)免疫吸附檢測（ELISA）操作步驟

    酶聯(lián)免疫吸附檢測一般采用雙抗夾心法，主要原理是將一種針對待測抗原的抗體（捕獲抗體）包被到聚丙烯96孔板中，然后利用抗原抗體之間的特異性結(jié)合來吸附待測抗原，再利用標(biāo)記生物素或酶的針對待測抗原其它表位的檢測抗體定量檢測吸附到96孔板中的待測抗原。實(shí)驗(yàn)步驟如下：

1. 樣品孵育:取出包被了捕獲抗體的96孔酶標(biāo)板，加入系列稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品，室溫或37℃孵育1小時。

2. 清洗：樣品孵育結(jié)束后，倒去樣品，利用洗滌液（含0.2%吐溫-20的PBS）清洗酶標(biāo)板3次，300μl/孔，每次1分鐘。

3. 檢測抗體孵育：酶標(biāo)板各孔加入100μl檢測抗體，室溫或37℃孵育1小時。

4. 清洗：倒去檢測抗體，利用洗滌液清洗酶標(biāo)板3次，300μl/孔，每次1分鐘。

5. 酶標(biāo)親和素孵育：各孔加入100μl酶標(biāo)親和素，室溫或37℃孵育0.5小時。

6. 清洗：倒去酶標(biāo)親和素溶液，利用洗滌液清洗酶標(biāo)板4次，300μl/孔，每次1分鐘。

7. 底物反應(yīng)：各孔加入100μl酶反應(yīng)底物，室溫或37℃孵育5-10分鐘。然后加入100μl終止液終止反應(yīng)。

    8. 上機(jī)檢測。